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細(xì)說(shuō)腫瘤解離試劑盒的樣品收集、處理及保存方法
更新時(shí)間：2022-07-22 瀏覽次數(shù)：1883
腫瘤解離試劑盒已被開(kāi)發(fā)用于從人腫瘤組織中溫和、快速地產(chǎn)生單細(xì)胞懸液。 該試劑盒用于產(chǎn)生大量腫瘤細(xì)胞和腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞，同時(shí)保留重要的細(xì)胞表面表位。該試劑盒與gentleMACS™ Dissociators結(jié)合，非常適合用于節(jié)省時(shí)間和可重復(fù)的制備單細(xì)胞懸液。
腫瘤解離試劑盒試劑準(zhǔn)備：
1、使用前將所有的試劑和標(biāo)本緩慢均衡至室溫（18-25℃），試劑不能直接在37℃溶解。
2、標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）：每瓶標(biāo)準(zhǔn)品加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1mL，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為2000pg/mL。準(zhǔn)備7個(gè)稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的EP管，每個(gè)EP管中加入150μL的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，如圖所示依次倍比稀釋成不同的梯度， 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液（0pg/mL）直接作為空白孔。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
3、濃洗滌液：用580mL蒸餾水或去離子水將20mL濃洗滌液稀釋至600mL，進(jìn)行30倍稀釋。
腫瘤解離試劑盒的樣品收集、處理及保存方法：
1、血清：操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離；
2、血漿：EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒；
3、細(xì)胞上清液：1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物；
4、組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液；
5、保存：如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測(cè)前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。